WWW.DISS.SELUK.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА
(Авторефераты, диссертации, методички, учебные программы, монографии)

 

Разработка методов анализа индикаторных компонентов в фиточаях и биологически активных добавках на их основе

На правах рукописи

ВЛАСОВ АЛЕКСАНДР МИХАЙЛОВИЧ

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ АНАЛИЗА ИНДИКАТОРНЫХ КОМПОНЕНТОВ В ФИТОЧАЯХ И биологически активных добавках НА ИХ ОСНОВЕ

15.00.02. Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени

кандидата фармацевтических наук

МОСКВА 2006

Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова и ГУ НИИ питания РАМН

Научные руководители:

доктор фармацевтических наук

Раменская Галина Владиславовна

доктор химических наук

Эллер Константин Исаакович

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук

Сорокина Алла Анатольевна

кандидат фармацевтических наук

Титова Анна Васильевна

Ведущая организация:

Всероссийский научно-исследовательский институт

лекарственных и ароматических растений РАСХН

Защита состоится «18»  декабря 2006 г. в  14 часов на заседании диссертационного совета Д.208.040.09 при ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова (119019, г. Москва, Никитский бульвар, 13).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Московская Медицинская Академия им. И.М. Сеченова, по адресу: 117998, г. Москва, Нахимовский проспект, д.49

Автореферат разослан «_____»_________________2006 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета Д.208.040.09,
доктор фармацевтических наук, профессор Наталья Петровна Садчикова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Существование большого числа сборов, фиточаев и биологически активных добавок к пище, представляющих собой многокомпонентные смеси растительного сырья делает все более актуальной проблему определения их безопасности и подлинности, а также разработки достоверных критериев идентификации. [В.А. Тутельян, Б.П. Суханов, 1999 г.; Т.Л. Пилат, А.А. Иванов, 2002 г.]

Необходимость определения незначительных концентраций действующих веществ на фоне сложного матрикса БАД предъявляет высокие требования к селективности и чувствительности методов анализа.

Решение этих задач затруднено в связи с отсутствием в большинстве случаев достоверных методов контроля маркеров в составе комплексных БАД. Большинство существующих не хроматографических методов определения индикаторных компонентов растительных БАД неселективные, трудоемки и могут в отдельных случаях приводить к получению ложноположительных результатов, а также к искажению количественных данных.

Одними из наиболее перспективных методов для решения этих задач являются хроматографические методы, сочетающие высокую эффективность разделения компонентов БАД с избирательностью и чувствительностью детектирования. Во многих зарубежных фармакопеях существует тенденция к применению современных методов на основе ВЭЖХ. [USP 29; BP 2004; JP 14]

В виду того, что большинство продуктов вторичного метаболизма растений существуют в виде относительно полярный гликозидов или агликонов полифенольной природы, предпочтительно определение в режиме распределительной обращено фазовой хроматографии, обеспечивающей разделение как по количеству функциональных групп, так и в пределах одного гомологического ряда.

Особенно актуальным является идентификация индивидуальных биологически активных веществ с помощью современных хроматографических методов, в случае оценки качества и стандартизации продуктов, включающих многокомпонентное растительное сырье и особенно экстракты.

Применение современных методов разделения с достоверной идентификацией индикаторных компонентов позволяет точнее установить корреляцию между содержанием вещества, качеством препарата и потенциальной биологической или фармакологической активностью.

В результате анализа составов фиточаев и БАД, существующих в настоящее время на рынке и представленных для государственной регистрации, а также изучения нормативно-методической базы по стандартизации растительного сырья, были определены наиболее широко и часто используемые ингредиенты многокомпонентных смесей, требующие разработки новых методов оценки подлинности и стандартизации.

Все вышесказанное определило цель и задачи исследования.

Цель и задачи исследования

Цель: разработать методики анализа индикаторных компонентов в фиточаях и БАД на их основе, пригодные для рутинного контроля качества.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи.

  • Изучить физико-химических свойства индикаторных компонентов.
  • Разработать методики пробоподготовки фиточаев и БАД, обеспечивающие наибольшую эффективность экстракции, характеризующиеся невысокой трудоемкостью.
  • Подобрать оптимальные хроматографические условия для определения индикаторных компонентов на фоне сложного матрикса.
  • Оценить параметры пригодности хроматографических систем.
  • Разработать методики количественного определения индикаторных компонентов в фиточаях.
  • Оценить метрологические характеристики разработанных методик.
  • Апробировать разработанные методики на образцах растительного сырья, экстрактов растительного сырья, фиточаях и БАД на его основе.

Научная новизна. Изучены хроматографические свойства катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты.

Впервые изучены спектры флуоресценции арбутина, гидрохинона, салидрозида.

Разработаны оригинальные методики идентификации и количественного определения индикаторных компонентов (для катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты) в многокомпонентных фиточаях и БАД на их основе.

Практическая значимость

Методики идентификации и количественного определения индикаторных компонентов (катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислота, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты) внедрены и используются при эксертизе в процессе государственной регистрации фиточаев и БАД в ГУ НИИ питания РАМН, ФГУЗ Федеральный центр гигиены и эпидемиологии.

Подготовлен проект дополнения к «Руководству по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище». – М.2004,Р.4.1.1672-03., включающее все разработанные нами методики.

Апробация работы. Результаты работы доложены на Конференции молодых ученых «Окружающая среда и здоровье» (апрель 2005 г., Суздаль); на научных конференциях кафедры фармацевтической химии ММА им. И.М.Сеченова (2003–2006 гг., Москва); на семинаре «Аналитическая химия в контроле безопасности, качества и подлинности пищевых продуктов и биологически активных добавок к пище» AnalyticaExpo-2006, Москва (апрель 2006 г., Москва), конгрессе «Фитофарм 2006» (июнь 2006 г., Санкт-Петербург)

Публикация результатов исследования. По результатам проведенных исследований опубликовано 13 печатных работ.

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармацевтической химии фармацевтического факультета ММА им. И. М. Сеченова «Совершенствования контроля качества лекарственных средств» (№ государственной регистрации 01.200.110545).

Основные положения, выносимые на защиту.

  1. Разработанные методики хроматографического анализа и пробоподготовки индикаторных компонентов (катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты).
  2. Результаты определения содержания индикаторных компонентов в растительном сырье и продуктах на его основе (фиточаях, БАД, лекарственных препаратах – всего 180 образцов).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, выводов, списка цитируемой литературы из 109 названий (65 из которых зарубежные). Работа иллюстрирована 42 таблицами и 25 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Оборудование и реактивы

Для проведения исследований была использована система: «Agilent 1100» (США) с УФ-спектрофотометрическим детектором на диодной матрице (УФ-ДМ), флуориметрическим детектором (ФЛД), масс-спектрометрическим детектором «Agilent» 1100 series LC/MSD Trap SL family (США), в качестве неподвижной фазы использовались хроматографические колонки разных производителей: Zorbax Eclipce XDB C8 150х4.6 mm (США), Phenomenex Luna 5 C18(2) 250 х 4,6 мм, США, Agilent Hypersil AA-ODS 200 х 2,1 мм, США. Для спектрофотометрического анализа исследуемых соединений использовался спектрофотометр фирмы GBC UV- visible Cintra 6 Spectrophotometer (Австралия) с диапазоном длин волн от 190 нм до 1100 нм.

Применялось следующее вспомогательное оборудование: весы Sartorius BP 121S; рН-метр Metter Toledo MP220; ультразвуковой генератор, дистиллятор ДЭ-10; аппарат для получения деионизированной воды «Водолей».

При приготовлении подвижных фаз и пробоподготовки использовались: ледяная уксусная кислота «ОСЧ»; трифторуксусная кислота «ОСЧ»; триэтиламин «ОСЧ»; ацетонитрил, марки для ВЭЖХ; метанол, марки для ВЭЖХ; кислота о-фосфорная, «ХЧ», спирт этиловый ректификованный; кислота муравьиная безводная; вода бидистиллированная, деионизированная.

Стандартные образцы

При разработке методик и проведении аналитических исследований по содержанию индикаторных компонентов нами были использованы коммерчески доступные стандартные образцы галловой кислоты, катехина, эпикатехина, эпигаллокатехина, эпигаллокатехин галлата, катехин галлата, эпикатехин галлата, галлокатехин галлата, кофеина, теофиллина, теобромина, теафлавина, глицирризиновой кислоты, арбутина, гидрохинона, силибина, силикристина, силидианина, салидрозида, гиперицина, гиперфорина, гиперозида, рутина, сеннозида А, сеннозида В, розмариновой кислоты, валереновой кислоты, схизандрина, -схизандрина, элеутерозида В, элеутерозида Е, производства компаний PhytuLab, CromaDex, Sigma-Aldrich, INDOFINE Chemical.

Приготовление растворов стандартных образцов

Для приготовления растворов стандартных образцов с концентрацией 0,1 мг/мл 10 мг стандарта, высушенного до постоянной массы, растворяли в 100 мл метанола. Растворы хранили при -25 0С в течение 6 месяцев.

Приготовление рабочих растворов стандартных образцов

Для приготовления рабочих стандартных образцов (РСО) с концентрацией 1, 5 и 10 мкг/мл 1, 5 и 10 мл раствора стандартного образца, соответственно, разводили до 100 мл метанолом. РСО хранили в холодильнике при -1-2 0С в течение месяца.

Объекты исследования

В ходе эксперимента нами были исследованы различные виды растительного сырья (камелия китайская, зверобой, брусника, толокнянка, бадан, расторопша, валериана, сенна, элеутерококк, лимонник, мелисса, розмарин), экстрактов на основе растительного сырья, а также был проанализирован ряд фиточаев и БАД (около 120 образцов), проходящих предрегистрационную экспертизу в ГУ НИИ питания РАМН.

Обработка полученных результатов

Для оценки пригодности хроматографической системы рассчитывали следующие параметры: коэффициент емкости (k’), число теоретических тарелок (N), коэффициент асимметрии (As), селективность () и степень разделения (R). Для вычисления этих показателей использовали алгоритмы программы обработки хроматографических данных ChemStations, Agilen и общие фармакопейные статьи USP29 и ВР2004.

Статистическая обработка результатов количественного определения проводилась в соответствии с требованиями ГФ XI. При статистической обработке оценивались следующие параметры: среднее выборки (Хср), дисперсия (s2), стандартное отклонение (s), доверительный интервал (х ср), относительная погрешность (), для решения вопроса о наличии или отсутствии систематической ошибки вычисляли критерий Стьюдента (t), если рассчитанный коэффициент Стьюдента был больше табличного значения, то рассчитывали систематическую ошибку ().

ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАТЕХИНОВ В ЧАЕ И БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВКАХ К ПИЩЕ НА ОСНОВЕ ЭКСТРАКТОВ ЧАЯ

Подготовка проб для анализа.

БАД и фиточаи на основе чая. 1,0 г образца, высушенного до постоянной массы, измельчают и экстрагируют 100 мл 0,1% раствора фосфорной кислоты при нагревании на водяной бане в течение 1 часа. Затем образец обрабатывают ультразвуком. БАД и продукты на основе экстракта чая 1,0 г измельчают и растворяют в 250 мл 0,1% раствором фосфорной кислоты, обрабатываем ультразвуком.

Проведение анализа ВЭЖХ. Колонка: Phenomenex Luna C18(2), 5, 4,6250; условия градиентного элюирования: фаза А: трихлоруксусная кислота, рН=2,5;фаза В: ацетонитрил; 0 мин. – 4%В; 25 мин. – 25%В; 40мин. – 25%В; скорость подвижной фазы 1 мл/мин, детектирование: УФ, =288 нм, объем вводимой пробы 10 мкл.

Таб. 1. Параметры разделения полифенольных компонентов чая совместно с пуриновыми алкалоидами в условиях градиентного элюирования.

Компоненты чая tR, мин. K N As R
галловая кислота 8,25 1,846 13600 1,1 1,718 1,623 1,144 1,105 1,027 1,078 1,250 1,086 1,138 1,022 1,010 19,25 33,5 4,28 16,86 2,73 8,14 27,99 2,62 29,06 3,86 1,04
теобромин 12,09 3,172 26400 1,1
катехин 18,94 5,515 33700 1,2
кофеин 19,75 6,310 52800 1,1
эпикатехин 23,12 6,973 58200 1,1
эпигаллокатехин галлат 23,67 7,162 67100 1,1
галлокатехин галлат 25,29 7,723 75500 1,1
эпикатехин галлат 30,89 9,654 134000 1,2
эпигаллокатехин 31,42 10,490 135000 1,2
теафлавин 37,52 11,939 137000 1,2
теафлавин-3-галлат 38,29 12,206 142000 1,2
теафлавин-3,3’-дигаллат 38,65 12,328 127000 1,2

Предел обнаружения для катехинов составил 1,1 мг/л, предел количественного определения 6,5 мг/л, линейность наблюдалась при концентрациях от 1,0 до 1000 мг/л, коэффициент корреляции был близок к единице.

Рис. 1. Хроматограмма экстракта черного чая. 1 – галловая кислота; 2 – катехин; 3 – кофеин; 4 – эпикатехин; 5 – эпигаллокатехин галлат; 6 - галлокатехин галлат; 7 - эпикатехин галлат; 8 – эпигаллокатехин; 9 – теафлавин; 10 – теафлавин-3 – галлат; 11 – теафлавин-3,3’ -дигаллат

Вещество Х ср s2 s x ср %
кофеин 562,3 130,8 11,436 14,21 2,52
эпикатехин 1013,2 273,6 16,540 20,56 2,03
эпигаллокатехин 991,8 788,4 28,078 34,90 3,51
эпикатехингаллат 1116,2 297,1 17,236 21,43 1,92
эпигаллокатехин галлат 1053,1 858,5 29,300 36,42 3,46
галловая кислота 1123,4 2388,5 48,872 60,76 5,41
галлокатехин галлат 981,1 88,1 9,380 11,66 1,19
теафлавин 1043,2 1629,7 40,369 50,19 4,81
теафлавин-3-галлат 943,5 1065,3 32,638 40,57 4,30
теафлавин-3,3’-дигаллат 986,9 779,5 27,919 34,71 3,52

Табл 2. Метрологическая оценка методики определения компонентов чая Р=95%, t(Р, f) = 2,78.)

Табл 3. Содержание индикаторных компонентов в чае и напитках на его основе.

Наименование продукта ГК ЭГК кофеин ЭК ЭГКГ ГКГ ЭКГ теафлавины
Содержание катехинов в мг на 100 мл настоя, приготовленного из расчета 2г чая на 200мл
Черный чай «Лисма» 4.

06

26.41 51.41 8.44 13.03 0.94 0.68 3.72
Черный чай «Акбар» 6.07 14.61 47.96 16.96 10.85 1.19 7.13 1.05
Черный чай «Липтон» 5.99 13.82 46.87 28.19 9.04 1.80 9.11 1.03
Зеленый чай «Королевский» 21.62 16.48 47.43 12.76 108.98 8.08 22.81 -
Зеленый чай «Тэнг» 2.21 32.54 31.35 8.48 111.71 3.54 12.36 -
Зеленый чай«Липтон» 2.21 13.27 19.05 4.48 33.72 1.83 3.58 -
Содержание катехинов в чайных напитках (мг на 100 мл напитках)
Ice Tea – Липтон 3.30 1.43 3.91 0.36 0.42 0.12 0.03 -
Зел. Чай – Липтон 2.91 15.37 12.67 5.85 33.66 2.29 3.96 -
Чай с жасмином - Фрукто 0.29 8.80 7.24 3.62 11.67 0.77 1.44 -
Caprise 1.06 8.55 6.52 2.86 9.12 1.03 0.74 -
Nestea 0.06 - 3.99 0.15 0.14 - 0.02 -
Зеленый чай с жасмином - Фрукто 3.73 3.23 12.86 1.41 10.50 6.86 2.27 -
Содержание катехинов мг в 1г экстракта чая
Белый 2.59 75.97 92.87 49.29 227.11 19.73 58.59
Черный 22.21 10.36 54.19 13.73 164.51 16.47 55.10 30.97
Зеленый 91.46 83.42 110.50 35.78 320.14 51.98 61.01 -

Максимальные концентрации катехинов были обнаружены в зеленом чае (от 170 до 190 мг/100 мл с преобладанием эпигаллокатехин галлата), в черном чае содержание катехинов составило от 50 до 70 мг/100 мл, которые были представлены в основном эпигаллокатехином и эпикатехином. Содержание кофеина составило в черном чае около 50 мг/100 мл, в зеленом чае – от 30 до 47 мг/100 мл. Эти величины сопоставимы с адекватными уровнями потребления катехинов и кофеина. Теафлавин в количествах от 1 до 4 мг/100 мл был обнаружен только в образцах черного чая. Большинство безалкогольных чайных напитков на основе черного чая характеризовались существенно более низкими концентрациями катехинов (от 0,4 до 16 мг/100 мл) и кофеина (от 3 до 16 мг/100 мл) при полном отсутствии теафлавина. Более высоким было суммарное содержание катехинов в напитках на основе экстракта зеленого чая, но оно также было ниже соответствующих значений для традиционного зеленого чая (от 24 до 64 мг/100 мл) Содержание кофеина в напитках было в 3-10 раз ниже, чем в традиционном чае.

Табл 4. Содержание индикаторных компонентов чая в БАД на его основе.

Наименование БАД ГК ЭГК коф ЭК ЭГКГ ГКГ ЭКГ
БАД «Грацилак», мг/капс 0,42 3,2 6,44 4,1 9,14 1,13 4,44
БАД «Менопауза день - ночь» мг/табл 0,32 10,1 22,29 6,36 55,18 2,97 8,09
БАД «Алфавит эффект» мг/табл 1,16 1,61 13,03 3,43 4,37 0,73 0,26
БАД «Тианин» мг/капс 0,76 1,89 38,31 3,26 16,92 0,18 4,05
БАД «Эпигал Велес» мг/г 0,8 9,61 0,63 2,92 684,37 16,2 54,83
БАД «Inneov Густота волос» мг/капс 0,97 19,36 10,08 13,54 37,25 2,3 4,91
БАД «Терра Плант – зеленый чай» мг/таб 0,59 3,94 2,45 3,11 21,66 1,75 3,32
БАД «Теавит» мг/таб 1,01 0,64 0,01 0,83 56,39 0,08 0,42
БАД «Tegreen»мг/капс 0,76 28,58 0,64 11,75 157,61 8,39 18,69
БАД «Эффиминсил-фигура» мг/капс 0,40 7,59 8,12 3,52 21,70 0,71 4,70
БАД «Агелесс» мг/капс 1,30 4,92 3,98 2,21 30,79 3,43 6,37
БАД «Сарасвати» мг/таб 0,27 0,56 2,22 1,12 1,08 0,12 0,81

Катехины являются основными полифенольными компонентами чая и БАД на его основе. Как следует из таблицы, содержание катехинов в различных образцах значительно отличается. Если сравнивать с содержанием катехинов в традиционном напитке чая (около 100 мг/100 мл) с рекомендуемым адекватным уровнем потребления (50-150 мг/сут) и содержанием катехинов БАД, то очевидно, что многие БАД («Грацилак», «Алфавит эффект», «Сарасвати») не могут рассматриваться как существенный регулярный источник катехинов. И лишь некоторые («Менопауза день-ночь», «Эпигал велес», «Тигрин», «Тиавит») могут обеспечить достаточное потребление катехинов. Таким образом, стандартизация продуктов из чая и БАД на его основе по содержанию кофеина и катехинов, позволяет выявить недоброкачественные продукты (фальсификаты) и оценить суточное потребление биологически активных веществ с данным продуктом.

ОПРЕДЕЛЕНИЕ АРБУТИНА И ГИДРОХИНОНА В ЛИСТЬЯХ ТОЛОКНЯНКИ, БРУСНИКИ, КОРНЕВИЩАХ БАДАНА И ФИТОПРЕПАРАТАХ НА ИХ ОСНОВЕ

Подготовка проб для анализа. БАД и фиточаи на основе сырья толокнянки, брусники и бадана. 1,0 г образца экстрагируют 100 мл 25% водного этанола и нагревают на водяной бане в течение 20 минут. БАД и препараты на основе экстракта толокнянки, брусники и бадана 1,0 г растворяют в 250 мл 25% этанола.

Проведение анализа ВЭЖХ. Колонка: Phenomenex Luna 5u C18(2), 5, 4,6250, подвижная фаза: метанол-вода (15:85 % об.)., скорость подачи подвижной фазы: 1,0 мл/мин, детектирование: флуорометрическое ex=280нм и em=320нм, объем вводимой пробы 10 мкл.

рис.2. хроматограмма БАД «Фиторен»

Табл 5. Параметры хроматографического разделения арбутина и гидрохинона.

Стандарт tR k’ N As R
Арбутин 3,95 0,88 10200 1,0 2,05 5,3
Гидрохинон 5,90 1,81 9740 1,1

Предел обнаружения составил 0,01 мг/л, предел количественного определения 0,05 мг/мл, линейность наблюдалась при концентрациях от 0,05 до 300 мг/л, коэффициент корреляции был близок к единице.

Табл 6.Метрологические характеристики методики (Р=95%, t(Р, f) = 2,78).

Индикаторный ком. Х ср s2 s x ср %
Арбутин 94,33 5,856 2,41 3,00 3,18
Гидрохинон 2,29 0,004 0,06 0,08 3,43

Табл 7. Содержание арбутина и гидрохинона в растительном сырье.

Образец Содержание мг/г
арбутин гидрохинон
Листья брусники, ОАО «Красногорсклексредства», пачки 57,5 0,8
Листья брусники, ОАО «КЛС», ф/п 50,2 1,47
Листья толокнянки, ОАО «КЛС», пач. 90,0 1,8
Листья толокнянки, ОАО «КЛС», ф/п 83,5 2,4
Корневище бадана 54,3 27,1
Экстракт бадана «реликт» 94,7 18,9
Экстракт бадана, ОАО Артлайф 148,5 74,3

Арбутин и гидрохинон, являясь доминирующими фенольными соединениями брусники, толокнянки и бадана (5-9% от сухой массы), могут рассматриваться как индикаторные. Во всех исследованных образцах растительного сырья были обнаружены значительные концентрации индикаторных фенольных соединений, что позволяет рассматривать их как источник арбутина и гидрохинона. Сниженное содержание арбутина может свидетельствовать о низком качестве исходных субстанций, также как значительное преобладание гидрохинона может свидетельствовать о недоброкачественности продукта, вследствие несоблюдения условий заготовки и сушки растительного сырья. Этот вывод подтверждается увеличением содержания гидрохинона в почерневших листьях, являющихся нормируемой примесью брусники и толокнянки.

Табл 8. Содержание арбутина и гидрохинона в БАДах.

Название образца Содержание арбутина Содержание гидрохинона
1. БАД «Гербафлю» 10,6мг/фп 0,02мг/фп
2. БАД «Нефроклинз» 4,6мг/капс 0,05мг/капс
3. БАД «Фиторен» 17,0мг/капс 0,06 мг/капс
4. БАД «Ренсепт» 7,28мг/таб 0,05 мг/таб
5. БАД «Эроктон» 15,5мг/таб 0,15 мг/таб
6. БАД «Травы для сердца» 6,1мг/таб 0,03 мг/таб
7. БАД «Гербамарин общеукрепляющий» 0,034мг/мл менее предела обнаружения
8. БАД «Уринорм» 1,26мг/г 0,02 мг/г
9. БАД «Тигровый глаз артро» 3,51мг/таб 0,18 мг/таб
10. БАД «Нутрилон-хром» 0,12мг/г 0,02 мг/г
11. БАД «Гемовизин» 2,95мг/капс 0,03 мг/капс
12. БАД «Метаболайн №2» 1,95мг/капс 0,26 мг/капс
13. БАД «Иозис» 1,52мг/капс 0,01 мг/капс
14. БАД «Взвар клюквенный» 0,48мг/мл 0,03 мг/таб
15. БАД «Грин систем №5» 5,13мг/таб 0,13 мг/таб
16. БАД «Бальзам. Алтайские травы №7» 0,022мг/мл 0,004 мг/мл
17. БАД «Урокам» 5,69мг/г 0,15 мг/г
18. БАД «Лимфовит У» 0,226%. 0,001%
19. БАД «Ортилиус» 2,9 мг/капс 0,08 мг/капс
20. БАД «Фитолюкс – 17» 0,57% 0,02%

В некоторых исследованных БАДах были обнаружены незначительные концентрации индикаторных фенольных соединений, что не позволяет рассматривать их как источник арбутина. В этой связи полученные результаты свидетельствуют о необходимости использования разработанного подхода для достоверной оценки качества препаратов на основе брусники и толокнянки.

ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФЛАВОЛИГНАНОВ В БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВКАХ К ПИЩЕ И ФИТОЧАЯХ НА ОСНОВЕ РАСТОРОПШИ ПЯТНИСТОЙ

Подготовка проб. БАД и фиточаи на основе сырья расторопши. 1,0 г образца экстрагировали 100 мл 50% водного этанола на водяной бане в течение 1 часа. БАД и препараты на основе экстракта расторопши 1,0 г растворяли в 250 мл 100% этанола. Проведение анализа ВЭЖХ. Колонка: Phenomenex Luna C18(2), 5, 4,6250 подвижная фаза: (А) водный раствор трихлоруксусной кислоты, рН 2,5; (В) -метанол: 0 мин – 29%В; 20 мин – 65%В; 40 мин – 65%В. Скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин,температура колонки: 40 0С, детектирование: УФ. =288 нм, объем вводимой пробы 10 мкл.

Табл 9. Параметры хроматографического разделения флаволигнанов.

флаволигнаны tR, мин. K N As R
Изосиликристин 13,26 12,3 30700 1,1 1,04 1,09 1,25 1,03 1,07 1,02 2,1 3,0 6,5 2,5 3,7 1,5
Силикристин 13,86 12,9 62400 1,1
Силидианин 15,13 14,1 34500 1.2
Силибин А 18,66 17,7 105000 1,0
Силибин В 19,18 18,2 92000 1,0
Изосилибин А 20,42 19,4 136000 1,0
Изосилибин В 20,74 19,7 121000 1,1

Предел обнаружения флаволигнанов составил 1,0 мг/л, предел количественного определения 6,5 мг/мл, линейность наблюдалась при концентрациях от 1,0 до 500 мг/л, коэффициент корреляции был близок к единице.

Табл 10. Метрологические характеристики методики (Р=95%, t(Р, f) = 2,78).

Вещество Х ср s2 s x ср %
Силибин А 61,4 3,20 1.788 2.22 3.62
Силибин В 107,0 6,30 2.509 3.12 2.91
Изосилибин А 57,4 2,04 1.428 1.77 3.09
Изосилибин В 52,7 1,19 1.090 1.35 2.57
Силикристин 115,0 12,18 3.489 4.33 3.77
Изосиликристин 22,6 0,11 0.331 0.41 1.82
Силидианин 182,3 21,90 4.679 5.81 3.19

В результате проведенных исследований нами установлено, что содержание силибина в расторопше составляет 5,5-6 мг/г, в шроте после удаления липидов содержание силибина увеличивается до 7-9 мг/г, суммарное содержание флаволигнанов в плодах расторопши и силимарине составляет 2,5% и 60% соответственно.

Рис 3. хроматограмма препарата «Карсил», содержащего экстракт расторопши.

Данные о содержании флаволигнанов могут использоваться в оценке их уровня потребления с биологически активными добавками или лекарственными препаратами. Таким образом, разработанная нами методика может быть использована для стандартизации и контроля качества лекарственных препаратов, сборов, биологически активных добавок и фиточаев, содержащих измельченные плоды расторопши или их экстракт.

Табл 11. Содержание флаволигнанов в различных лекарственных препаратах и биологически активных добавках

Наименование СК ИСК СД СБ- А СБ- В ИСБ-А ИСБ- В
Экстракт расторопши мг/г 0,024 0,044 0,281 0,019 0,045 0,026 0,008
Силимарин мг/г 11,504 2,257 43,236 6,142 10,703 5,738 5,273
«Карсил» мг/драже 1,211 0,022 0,218 0,638 1,300 0,496 0,238
«Гепабене» мг/капс 2,102 0,317 1,554 0,785 1,938 1,204 0,613
Расторопша с шиповником мг/г н/о н/о 610-4 410-4 510-4 н/о н/о
«Силимар» мг/таб 2,795 0,720 7,165 2,515 3,756 3,165 3,025
Масло расторопши мг/г 0,00026 н/о 0,00062 0,00044 0,00091 0,00071 0,00064
БАД «Плоды расторопши» мг/г 0,321 0,081 1,016 0,256 0,426 0,283 0,217
Шрот «Иван-да-Марья» мг/г 0,439 0,131 1,123 0,411 0,526 0,409 0,343
Шрот «Здравушка» мг/г 0,298 0,058 0,551 0,267 0,442 0,223 0,156
БАД «Гепар» мг/кап 0,362 0,246 0,532 0,113 0,152 0,117 0,109
БАД «Гепатофитон» мг/таб 0,208 0,149 0,471 0,112 0,163 0,133 0,146
Плоды урожая 2003 г.,% 0,306 0,072 0,801 0,245 0,404 0,228 0,168
Плоды урожая 2004 г.,% 0,294 0,067 0,747 0,217 0,376 0,212 0,158
Вызревшая расторопша,% 0,309 0,086 0,907 0,234 0,407 0,289 0,218
Недозревшие плоды,% 0,269 0,059 0,781 0,202 0,348 0,202 0,191

н/о – не обнаружено в пределах чувствительности метода

ОПРЕДЕЛЕНИЕ ИНДИКАТОРНЫХ КОМПОНЕНТОВ В ЗВЕРОБОЕ И ФИТОПРЕПАРАТАХ НА ЕГО ОСНОВЕ

Подготовка проб. БАД и фиточаи на основе травы зверобоя. 1,0 г образца экстрагировали 100 мл 50% водного этанола в течение получаса на водяной бане. БАД на основе экстракта зверобоя около 1,0г растворяли в 250 мл 50% этанола.

Проведение анализа ВЭЖХ. Неподвижная фаза: 250 4,6 мм SGE Wakosil II C18 RS, подвижная фаза: раствор А: 0,01М водный раствор ацетата натрия с рН=5,0; раствор В: ацетонитрил: 0 мин – 15%В; 40 мин – 90%В; 60 мин – 90%В. Скорость подвижной фазы 1 мл/мин, объем пробы 10 мкл, температура колонки 35 0С, гиперицин и псевдогиперицин определяют в видимой области спектра при 590 нм, гликозиды флавоноидов определяют при 360 нм и гиперфорин при 280 нм.

Предел обнаружения производных антрацена составил 0,8 мг/л, для флавонолгликозидов 1,0 мг/л, предел количественного определения антраценпроизводных 5,0 мг/л, флавонолгликозидов 6,0 мг/л, линейность наблюдалась при концентрациях от 1,0 до 500мг/л, коэффициент корреляции был близок к единице.

Рис 4. Хроматограмма экстракта зверобоя

Табл 12. Параметры хроматографического разделения ИК зверобоя

Компоненты зверобоя tR, мин. K N R
Рутин 16,93 15,9 14900 1,11 1,19 4,47 7,3
гиперозид 18,72 17,7 23400
псевдогиперицин 28,17 27,1 34800
гиперицин 33,41 32,4 31000
гиперфорин 37,83 36,8 41000

Табл 13.Метрологические характеристики методики (Р=95%, t(Р, f) = 2,78)

Вещество Х ср s2 s x ср %
рутин 7,46 0,0048 0,068 0,085 1,15
гиперозид 4,93 0,0074 0,086 0,107 2,17
псевдогиперицин 0,44 0,0001 0,010 0,014 3,22
гиперицин 0,38 0,0001 0,010 0,013 3,43
гиперфорин 0,70 0,0002 0,013 0,017 2,45

Табл 14. Содержание индикаторных компонентов зверобоя в образцах.

Наименование образца Содержание в образце
Гиперицин Псевдо-гиперицин Гиперфорин Рутин Гиперозид
Трава зверобоя (водное извл.) 0,23 мг/г 0,67 мг/г 0,02 мг/г 20,1 мг/г 9,93 мг/г
Трава зверобоя (спирт. извл.) 0,38 мг/г 0,44 мг/г 0,70 мг/г 7,46 мг/г 4,93 мг/г
Комплексный «Экстракт здоровье» 0,23 мг/г 0,02 мг/г 0,32 мг/г 3,81 мг/г 3,67 мг/г
БАД к пище «Аринамин» 0,002 мг/10 кап 0,02 мг/10 кап 0,22 мг/10 кап 3,35 мг/10 кап 1,95 мг/10 кап
БАД к пище «Фитомикс» 0,01 мг/г 0,01 мг/г 0,02 мг/г 0,25 мг/г 0,97 мг/г
БАД к пище «Good life» 0,11 мг/10 кап 0,15 мг/10 кап 0,29 мг/10 кап 6,22 мг/10 кап 4,29 мг/10 кап
БАД к пище «Зверобой с витамином С» 0,04 мг/10 таб 0,29 мг/10 кап 0,06 мг/10 кап 14,55 мг/10 кап 8,14 мг/10 кап
БАД к пище «Гипнар-Хитозан» 0,01 мг/10 таб н/о 0,05 мг/10 таб 0,18 мг/10 таб 0,08 мг/10 таб
БАД к пище «Сироп «Травник 2» н/о н/о 0,27 мг/кг 0,09 мг/кг 0,89 мг/кг

Как видно из представленной таблицы, флавонолгликозиды полнее извлекаются водой, а антраценпроизводные и особенно флороглицинол гиперфорин – спиртом. Проанализированные нами образцы БАД содержали различное количество индикаторных компонентов, так, БАД к пище «Сироп «Травник 2», «Фитомикс», «Аринамин», «Зверобой с витамином С», «Гипнар-Хитозан», содержат намного меньше биологически активных веществ, чем водные и спиртовые извлечения зверобоя и не являются добавками содержащими биологически активное вещество в концентрированном виде. Предложенная методика пригодна для селективного определения антраценпроизводных и флавоноидов зверобоя на фоне сложного матрикса БАД и других фитопрепаратов.

РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДРУГИХ ИНДИКАТОРНЫХ КОМПОНЕНТОВ РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ, ШИРОКО ПРИМЕНЯЕМОГО ПРИ ПРОИЗВОДСТВЕ ФИТОЧАЕВ И БАД

Табл 15. Условия хроматографического определения ИК.

Индиаторн Компонент Колонка Состав ПФ Детектирование Условия пробоподготовки
сырья экстрактов
Розмариновая кислота 250 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2) ГРАДИЕНТ А-0,1% фосфорная кислота; В-ACN; 0мин-12%В, 25мин-50%В СФМ =330нм 60% метанол, однократная экстракция, на водяной бане 30 мин 60% метанол,
Глицирризиновая кислота 250 4,6 мм Nucleosil Luna 5u C18(2) Ацетонитрил: р-р ТХУ с рН=2,5 (44:56) СФМ =254нм дистил. вода, на водяной бане 30 мин дистил. вода,
Элеутерозиды В и Е 250 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2) ГРАДИЕНТ А-ТХУ с рН=2,5; В-АCN; 0мин-10%В, 20мин-30%В, 27мин–10%В СФМ =220нм 50% этанол, на водяной бане 45 мин 50% этанол,
Схизандрин и гамма-схизандрин 250 4,6 мм SGE Wakosil II C18 RS ГРАДИЕНТ А-ТХУ с рН=2,5; В-ACN; 0мин-50%В, 20мин-95%В, 30мин – 95%В СФМ =254нм 80% этанол, на водяной бане 60 мин 80% этанол,
Валереновая кислота 250 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2) Р-р Фосфорной кислоты рН=2,4:ацетонитрил (35:65) СФМ =210нм Экстрагент – метанол, двухкратная экстракция, на водяной бане 30 мин – метанол. на водяной бане 30 мин
Салидрозид 250 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2) метанол-вода (23:77) ФД ex=280нм em=320нм 25% этанол, на водяной бане 30 мин 25% этанол,
Сеннозиды А и В 250 4,6 мм Phenomenex Luna 5u C18(2) ГРАДИЕНТ А-ТХУ с рН=2,5; В-МеOH; 0мин-29%В, 20мин-65%В, 40мин – 65%В СФМ =330нм 10% этанол, на водяной бане 30 мин 10% этанол, ультразвук,

Табл 16. Параметры хроматографического разделения индикаторных компонентов.

Индикаторный компонент tR, мин. K N As R
Валереновая кислота 10,16 3,839 14300 1,0
Розмариновая килота 13,11 5,243 49400 1,0
Глицирризиновая кислота 5,68 2,790 7700 1,0
Элеутерозид В Элеутерозид Е 11,07 4,799 49900 1,1 1,356 30,86
15,77 6,511 134000 1,2
Схизандрин -схизандрин 6,61 5,090 17600 1,1 2,42 16,2
14,71 12,36 24100 1,1
Салидрозид 8,21 2,911 25800 1,0
Сеннозид А Сеннозид В 14,98 6,142 63400 1,1 1,24 6,225
12,49 4,949 30500 1,1

Табл 17. Параметры количественного определения индикаторных компонентов

Соединение Предел обнаружения, мг/л Предел колич. определения мг/л Диапазон линейных концентраций мг/л Параметры линейной регрессии
Уравнение сглаживающей прямой Коэфф ициент корреляции
Валереновая кислота 1,5 9,0 1-1000 y=27958x+4332 0,9954
Розмариновая килота 1,0 6,0 1-1000 y=20727x-579 0,9875
Глицирризиновая кислота 1,5 9,0 1-1000 y=5289x+2341 0,9992
Элеутерозид В Элеутерозид Е 2,1 1,8 12,0 12,0 2-2000 2-2000 y=32706x+784 y=16748x+4512 0,9932 0,9851
Схизандрин -схизандрин 2,3 2,0 12,0 12,0 2-1000 2-1000 y=16607x+1312 y=36600x-1200 0,9947 0,9925
Салидрозид 0,005 0,01 0,01-50 y=118015x+10230 0,9991
Сеннозид А Сеннозид В 1,0 1,0 6,0 6,0 1-1500 1-1500 y=6342x+2341 y=7862x+1346 0,9966 0,9932

Табл 18.Метрологические характеристики методик.

Вещество Х ср s2 s x ср %
Валереновая кислота 10,3 0,0233 0,1526 0,189 1,84
Розмариновая килота 31,2 0,4037 0,6353 0,789 2,53
Глицирризиновая кислота 102,4 1,8916 1,3753 1,709 1,67
Элеутерозид В Элеутерозид Е 45,6 52,1 1,6977 2,9626 1,3029 1,7212 1,619 2,139 3,55 4,11
Схизандрин -схизандрин 97,3 99,4 3,3335 2,1428 1,8257 1,4638 2,270 1,819 2,33 1,83
Салидрозид 9,9 0,0093 0,0964 0,1199 1,21
Сеннозид А Сеннозид В 51,3 52,3 1,2679 1,7399 1,1260 1,3190 1,3999 1,6399 2,73 3,14

Выводы

  1. Изучены физико-химические свойства (хроматографическая подвижность, уф- и видимые спектры, масс-спектры) выбранных индикаторных компонентов. Для фенолопроизводных и их гликозидов (гидрохинон, арбутин, салидрозид) изучены флуоресцентные свойства и предложен новый метод ВЭЖХ анализа с флуорометрическим определение (ex=280нм и em=320нм), отличающийся высокой чувствительностью и селективностью.
  2. Изучено влияние растворителя и условий экстракции на степень извлечения индикаторных компонентов из фиточаев и БАД. Использование разработанных методик с высокой селективностью и чувствительностью, позволило использовать метод жидкостной экстракции без применения дополнительных методов концентрирования и очистки. Подобраны оптимальные и доступные экстрагенты для изученных соединений. Определено оптимальное время экстрагирования.
  3. Подобраны хроматографические системы для определения катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты. Предложено использовать для разделения веществ полифенольной природы подвижные фазы с рН=2,5, для антраценпроизводных (гиперицин и псевдогиперицин) с рН=5,5. Разработаны условия ВЭЖХ с градиентным элюированием для совместного определения большого числа индикаторных компонентов. В случае определения одного или двух компонентов в образце предложены, более простые методики с изократической подачей подвижной фазы.
  4. При оценке пригодности хроматографических систем, все разработанные методики показали хорошую эффективность (10000-100000 теоретических тарелок), высокую степень разделения и селективность (R= 1,0-30,0; 1,0)
  5. Разработаны методики количественного определения катехинов, флаволигнанов, арбутина, гиперозида, гиперицина, рутина, глицирризиновой кислоты, розмариновой кислоты, салидрозида, схизандринов, элеутерозидов, валереновой кислоты в многокомпонентных фиточаях и БАД на их основе.
  6. Предел обнаружения методик со СФМ детектированием составил 1мг/л, для методик с флуорометрическим детектирование от 0,005мг/. Предел количественного определения составил около 6мг/л и 0,03мг/л соответственно. Относительная погрешность составила от 1,1% и не более 5,5%.
  7. С помощью разработанных методик было проанализировано около 180 образцов растительного сырья, экстрактов, препаратов, а так же фиточаев и БАД к пище, проходящих экспертизу в ГУ НИИ питания РАМН. Обнаруженное содержание позволило стандартизовать продукт, оценить его качества и уровень потребления биологически активных веществ. Использование разработанных методик позволили установить, что около 10% проанализированных образцов либо не содержали предполагаемых индикаторных компонентов, либо содержали следовые количества, что указывает на фальсификацию или низкое качество продукта.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1.Тутельян В.А., Эллер К.И., Власов А.М. Разработка методов анализа индикаторных компонентов фиточаев и биологически активных добавок. // Материалы III межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека». - СПб., 2005. – С. 201-202.

2. Власов А.М. Эллер К.И. Определение арбутина и гидрохинона в фиточаях и БАД. // Материалы III межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека». - СПб., 2005.- С.201-202.

3. Власов А.М. Эллер К.И. Определение салидрозида в фиточаях и БАД на основе родиолы. // Материалы III межрегиональной научно-практической конференции «Питание здорового и больного человека». - СПб., 2005. – С.44.

4. Власов А.М. Определение основных компонентов экстрактов чая (Camelia sinensis) и БАД на их основе. // Материалы всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье». - Суздаль, 2005. - С. 272-274.

5. Власов А.М., Чукарина Е.В., Эллер К.И., Родионова Г.М. Определение флаволигнанов расторопши и фитопрепаратов на их основе с помощью обращенно-фазовой ВЭЖХ. // Материалы 9-го Международного конгресса Phytopharm. - СПб., 2005. – С. 203-204.

6. Эллер К.И., Власов А.М., Комарова Е.Л. Оценка подлинности растительных экстрактов как сырья для БАД Schizandra chinensis – Лимонник китайский. // «Рынок БАД».- 2005. - №5(25) октябрь. – С 33-35.

7. Власов А.М., Эллер К.И., Хромченкова Е.П. Сравнительный анализ биологически активных полифенольных компонентов чая и напитков на основе экстрактов чая. // Материалы VIII всероссийского конгресса «Оптимальное питание – здоровье нации». - Москва, 2005.- С. 298.

8. Эллер К.И., Власов А.М. Комарова Е.Л. Оценка подлинности растительных экстрактов как сырья для БАД Scutellaria baicalensis – Шлемник байкальский. // «Рынок БАД». - 2006. - №1(27) февраль. – С 38-39.

9. Эллер К.И., Власов А.М., Комарова Е.Л., Оценка подлинности растительных экстрактов, как сырья для БАД. Silybum marianum (L.) - Расторопша пятнистая. // «Рынок БАД».- 2006. - №2(28) апрель. – С 27-29.

10. Власов А.М, Эллер К.И., Раменская Г.В. Разработка аналитических подходов к стандартизации растительных экстрактов лимонника китайского - schisandra chinensis. // Материалы XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство». – Москва, 2006. – С. 505.

11. Власов А.М., Чукарина Е.В., Эллер К.И., Раменская Г.В.Применение ВЭЖХ для анализа биологически активных компонентов чая. // Сборник трудов 10-го Международного конгресса Phytopharm.- СПб, 2006 – С.38-43.

12. Чукарина Е.В., Власов А.М., Эллер К.И., Раменская Г.В. Определение индикаторных компонентов в фитопрепаратах на основе зверобоя продырявленного. // Сборник трудов 10-го Международного конгресса Phytopharm.- СПб, 2006 – С.370-374.

13. Власов А.М., Эллер К.И., Чукарина Е.В., Беседина Н.Б. Индикаторные компоненты водных извлечений травы зверобоя. // Фармация.- М., 2006. - №4 - С. 15-18



 
Похожие работы:

«Юркова Зоя Владимировна ПРОЦЕСС ФОРМИРОВАНИЯ АРХИТЕКТУРНО-ПЛАНИРОВОЧНОЙ СТРУКТУРЫ САНКТ-ПЕТЕРБУРГА ПЕРВОЙ ТРЕТИ XIX ВЕКА (НА ПРИМЕРЕ ТВОРЧЕСТВА А. А. МОДЮИ) Специальность 18.00.01 – История и теория архитектуры, реставрация и реконструкция историко-архитектурного наследия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата архитектуры Санкт-Петербург 2009 Работа выполнена на кафедре истории и теории архитектуры при ГОУ ВПО Санкт-Петербургский государственный...»

«Зайкова Елена Юрьевна АРХИТЕКТУРНО-ЛАНДШАФТНАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ ПРОСТРАНСТВ КОЛЛЕКТИВНОГО НАЗНАЧЕНИЯ В МАЛОЭТАЖНОЙ ЗАСТРОЙКЕ (на примере Московской области) 18.00.04 – Градостроительство, планировка сельских населенных пунктов АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата архитектуры Санкт-Петербург - 2008 Работа выполнена на кафедре урбанистики и дизайна городской среды ГОУ ВПО Санкт-Петербургский государственный архитектурно-строительный университет Научный...»

«ЕЖКОВ ВЛАДИМИР ОЛЕГОВИЧ КЛИНИКО-МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ НАРУШЕНИЯ МЕТАБОЛИЗМА У сельскохозяйственных и экзотических ПТИЦ И КОРРЕКЦИЯ ЕГО КОРМОВЫМИ ДОБАВКАМИ У КУР 16.00.02 – патология, онкология и морфология животных 16.00.01 – диагностика болезней и терапия животных АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Москва-2008 Работа выполнена в...»

«Федеральное архивное агентство Всероссийский научно-исследовательский институт документоведения и архивного дела Отраслевой центр научно-технической информации по документоведению и архивному делу ПЕРЕЧЕНЬ новых поступлений в СИФ ОЦНТИ неопубликованных разработок и информационных материалов за I квартал 2010 года Копии материалов можно заказать во ВНИИДАД (117393 Москва, Профсоюзная, 82 СИФ ОЦНТИ) тел. 718-79-71, 334-48-52 Материалы, отмеченные *) копированию не подлежат. Запросы направлять...»

«ПАПУНИДИ ЭЛЛАДА КОНСТАНТИНОВНА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ РАЗРАБОТКИ СРЕДСТВ ПРОФИЛАКТИКИ ПРИ СОЧЕТАННОМ ВОЗДЕЙСТВИИ НА ЖИВОТНЫХ ТОКСИЧНЫХ ЭЛЕМЕНТОВ, МИКОТОКСИНОВ И ПИРЕТРОИДОВ 16.00.04 – ветеринарная фармакология с токсикологией; 16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук Казань – 2008 Работа выполнена в ФГУ Федеральный центр...»

«Федеральное архивноеагентство Всероссийскийнаучно-исследовательский институт документоведения иархивного дела Отраслевой центрнаучно-технической информации по документоведению иархивному делу ПЕРЕЧЕНЬ новых поступлений в СИФОЦНТИ неопубликованных разработок иинформационных материалов за III квартал 2009 года Копии материалов можнозаказать во ВНИИДАД (117393 Москва, Профсоюзная,82 СИФ ОЦНТИ) тел. 718-79-71,334-48-52 Материалы,отмеченные *) копированию неподлежат. Запросынаправлять разработчикам,...»

«ЧУБАРОВА ГАЛИНА ДМИТРИЕВНА ИССЛЕДОВАНИЯ ПО СТАНДАРТИЗАЦИИ СЫРЬЯ И ПРЕПАРАТОВ АКОНИТА КАРАКОЛЬСКОГО. 15.00.02.фармацевтическая химия, фармакогнозия Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва-2009 Диссертационная работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова...»

«НАЗАРЕНКО ЕВГЕНИЙ ГЕОРГИЕВИЧ Эпизоотология бруцеллеза сельскохозяйственных животных в Иркутской области и усовершенствование противоэпизоотических мероприятий 16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Барнаул 2009 Работа выполнена в Федеральном государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования...»

«Баева Вера Михайловна ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЛЕКАРСТВЕННЫХ РАСТЕНИЙ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ МОЛЕКУЛЯРНО- -БИОЛОГИЧЕСКИХ МЕТОДОВ 15.00.02- фармацевтическая химия, фармакогнозия Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук Москва - 2009 Диссертационная работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия имени И.М. Сеченова Росздрава и в НИИ физизико-химической биологии им. А.Н. Бело-зерского МГУ им. М.В.Ломоносова Научные консультанты:...»

«Усманов Ринат Ибрагимович ЛОКАЛЬНОЕ УПРОЧНЕНИЕ КРУПНОГАБАРИТНЫХ ДЕТАЛЕЙ Специальность 15.09.00 – Технология, оборудование и автоматизация машиностроительных производств АВТОРЕФЕРАТ Магистерской диссертации Самара 2009 Работа выполнена в государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования Самарском Государственном Техническом университете на кафедре Инструментальные системы и сервис автомобилей. Научный руководитель: кандидат технических наук, доцент Круцило Виталий...»

«КОШЕЧКИНА АННА СЕРГЕЕВНА РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ АНАЛИЗА ФЛАВОНОВ КАК ИНДИКАТОРНЫХ КОМПОНЕНТОВ ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ 15.00.02 – фармацевтическая химия, фармакогнозия А втореферат диссертация на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук Москва - 2007 Работа выполнена в ГОУ ВПО Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова и ГУ НИИ питания РАМН Научные руководители: академик РАМН, доктор фармацевтических наук, профессор Арзамасцев Александр Павлович...»

«Шульга Николай Николаевич РАЗРАБОТКА И ИЗУЧЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТОВ ИЗ КРОВИ ЖИВОТНЫХ ДЛЯ ПОВЫШЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ НОВОРОЖДЕННЫХ ТЕЛЯТ И ПОРОСЯТ 16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук Екатеринбург – 2009 Работа выполнена в Дальневосточном зональном научно-исследовательском ветеринарном институте Российской академии...»

«Савельева Анна Юрьевна МИКРОСТРУКТУРА РЕПРОДУКТИВНЫХ ОРГАНОВ ПЕРЕПЕЛОК В ПОСТНАТАЛЬНОМ ОНТОГЕНЕЗЕ 16.00.02 – патология, онкология и морфология животных АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Барнаул 2009 Работа выполнена в Институте прикладной биотехнологии и ветеринарной медицины ФГОУ ВПО Красноярский государственный аграрный университет на кафедре анатомии и гистологии животных Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,...»

«ШЕВЧЕНКО ЛЮДМИЛА ВАСИЛЬЕВНА СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКАИ ЛЕЧЕНИЕ АССОЦИАТИВНЫХ ИНФЕКЦИОННЫХ БОЛЕЗНЕЙ НУТРИЙ 16.00.03 – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и...»

«Список научных и учебно-методических работ Шамне Николай Леонидович, профессор кафедры немецкой филологии №п/п Наименование работы, ее вид Форма работы (рукописная или печатная) Выходные данные (наименование издательства, журнала, год, кол-во страниц) Объем в п.л. или с. Соавторы 1 Безглагольные конструкции в разговорной речи рукописная Саратов, 1984. Деп. в ИНИОН...»

«Долгова Светлана Владимировна ВОЗДЕЙСТВИЕ ТЕРМИЧЕСКОЙ И ХИМИКО- ТЕРМИЧЕСКОЙ ОБРАБОТКИ НА ЛИНЕЙНОЕ РАСШИРЕНИЕ ВЫСОКОЧИСТОГО ЖЕЛЕЗА Специальность 15.06.01 – Металловедение и термическая обработка металлов и сплавов Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук Новокузнецк – 2010 Работа выполнена на кафедре физики металлов и новых материалов ГОУ ВПО Сибирский государственный индустриальный университет Научный руководитель: доктор технических наук...»

«КОРЯКИН ПАВЕЛ ВЛАДИМИРОВИЧ БИКОМПАКТНЫЕ РАЗНОСТНЫЕ СХЕМЫ И ЧИСЛЕННАЯ ДИАГНОСТИКА ОСОБЕННОСТЕЙ 01.01.07 – вычислительная математика АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата физико-математических наук Москва – 2010 Работа выполнена в отделе физико-химических свойств вещества Института математического моделирования РАН. Научный руководитель: член корреспондент РАН, доктор физико-математических наук Калиткин Николай Николаевич Официальные оппоненты: доктор...»

«ИНДЮКОВ Андрей Леонидович ФАРМАКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА И ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЦИДИСЕПТА-О ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ПОРОСЯТ И ТЕЛЯТ 16.00.04 – ветеринарная фармакология с токсикологией АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Воронеж – 2008 Работа выполнена в отделе фармакологии и токсикологии ГНУ Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии Россельхозакадемии Научный руководитель: доктор биологических наук,...»

«Михайлова Алина Николаевна Конформно-дифференциальная геометрия гиперполосы 01.01.04 – геометрия и топология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата физико-математических наук Казань-2002 Работа выполнена в Чувашском государственном педагогическом университете имени И.Я.Яковлева Научный руководитель: доктор физико-математических наук, профессор Столяров А.В. Официальные оппоненты: доктор физ.-мат. наук, профессор Шурыгин В.В. доктор физ.-мат. наук,...»

«БАБЕНКО Олег Олегович ЛЕЧЕБНО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ХЛОРОФИЛЛО-КАРОТИНОВЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ А-ГИПОВИТАМИНОЗЕ ПОРОСЯТ 16.00.01 – диагностика болезней и терапия животных АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Белгород – 2009 Работа выполнена в ФГОУ ВПО Белгородская государственная сельскохозяйственная академия Научный руководитель – доктор ветеринарных наук, профессор Резниченко Людмила Васильевна Официальные оппоненты: Концевенко...»








 
2014 www.avtoreferat.seluk.ru - «Бесплатная электронная библиотека - Авторефераты диссертаций»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.